Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit

活性氧（ROS）檢測試劑盒

搜索關鍵詞：

Reactive Oxygen Species，ROS 活性氧；DCFH-DA；JC-1線粒體模電位探針；JC-10；CAS NO：4091-99-0；

研究意義：

活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。

產(chǎn)品描述：

活性氧檢測試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit，或ROS Assay Kit）是一種利用熒光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate）進行細胞內(nèi)活性氧水平檢測的常用方法。檢測原理在于DCFH-DA本身無熒光，能自由穿過細胞膜，一旦進入細胞后，被胞內(nèi)的酯酶水解生成無熒光的DCFH。DCFH不能穿透細胞膜，從而保留在胞內(nèi)。此時胞內(nèi)的活性氧可以氧化DCFH生成有熒光的DCF。通過DCF熒光的強弱即可反映活性氧的水平。
 

本試劑盒包含活性氧陽性對照Rosup，利于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物，濃度為50mg/ml。

因檢測對象和反應體系的不同，本試劑盒可檢測100-500個樣品。
 

產(chǎn)品組成：

保存與運輸方法：

保存：-20ºC保存，有效期一年。

運輸：冰袋運輸。

使用方法
1.   裝載探針

【注意】：對于刺激時間較短（通常2h以內(nèi)）的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照Rosup和/或待研究藥物刺激細胞；對于刺激時間較長（通常6h以上）的細胞，先用活性氧陽性對照Rosup或待研究藥物刺激細胞，后裝載探針。

1.1  原位裝載探針（僅適用于貼壁細胞）
a）檢測前一天進行細胞鋪板，確?；钚匝鯔z測當天細胞匯合率達到50~70%。
b） 吸出細胞培養(yǎng)液，加入適量體積以及濃度的待研究藥物，于37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，具體誘導時間根據(jù)細胞類型和藥物自身特性決定。
【可選】陽性對照Rosup：先用無血清培養(yǎng)液按照1:1000比例稀釋陽性對照，通常 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)刺激20~30min可以觀察到顯著的活性氧水平提高，但依細胞類型會有比較明顯差異【刺激時間可參考文獻或實驗經(jīng)驗來調整】。如果刺激后30min內(nèi)未觀察到活性氧水平升高，可以適當提高Rosup的工作濃度；反之，如果活性氧升高過快，則適當降低Rosup的工作濃度。
c）按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA （10mM），使其終濃度為10μM.。吸出細胞培養(yǎng)液，加入適當體積DCFH-DA工作液。
【注意】：加入體積以能充分蓋住細胞為宜。對于6孔板，每個孔加入DCFH-DA工作液不少于1ml。對于96孔板，每個孔加入DCFH-DA工作液不少于0.1ml。
d）37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20min。
e） 用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。
 

1.2       收集細胞后裝載探針
1）按照常規(guī)方法，清洗并收集足量的細胞。【注意】：保證細胞的狀態(tài)健康。
2）用適量體積以及濃度的待研究藥物重新懸浮細胞，于37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，具體誘導時間根據(jù)細胞類型和藥物自身特性決定。

【可選】陽性對照Rosup：先用無血清培養(yǎng)液按照1:1000比例稀釋陽性對照，通常 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)刺激20~30min可以觀察到顯著的活性氧水平提高，但依細胞類型會有比較明顯差異【刺激時間可參考文獻或實驗經(jīng)驗來調整】。如果刺激后30min內(nèi)未觀察到活性氧水平升高，可以適當提高Rosup的工作濃度；反之，如果活性氧升高過快，則適當降低Rosup的工作濃度。
3）  探針裝載前，按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA （10mM），使其終濃度為10μM.。
4）  離心，吸出細胞內(nèi)刺激藥物，之后用適量DCFH-DA工作液重懸細胞，使得細胞密度為1×10⁶~2×10⁷/ml。
【注意】：細胞密度需根據(jù)后續(xù)檢測體系，檢測方法，以及檢測總量來調整。例如，對于流式分析，單管檢測內(nèi)細胞數(shù)目控制在10⁴~ 10⁶之間。
5） 37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20min。每隔3~5min顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。
6）  用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。

2.   檢測
2.1    原位裝載法
2.2    收集細胞后裝載法

 
3.   參數(shù)設置
4.   其他說明

注意事項

1） 探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導致背景較高。

2） 探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。

3） 盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —  Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品。

MX4801 Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit  活性氧（ROS）檢測試劑盒

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