Benzonase Nuclease 全能核酸酶/廣譜核酸酶
                             （酵母重組表達，無細菌內毒素殘留，無蛋白酶污染）

產品關鍵詞：
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（廣譜核酸酶）；粘質沙lei氏菌（Serratia Marcescen）；非特異性核酸內切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；

基本描述：
Benzonase，中文名全能核酸酶，或廣譜核酸酶，一種源于粘質沙lei氏菌（Serratia Marcescen，又稱為靈桿菌）的非特異性核酸內切酶，由兩個*一樣的亞基構成，每個亞基大約30kDa，含有245個氨基酸和兩個必需的二硫鍵?？梢郧懈詈徒到飧鞣N形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環(huán)狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效。對核酸堿基序列無特異性要求，可在鏈內任意核苷酸間進行切割，廣泛用于去除生物制品中的核酸。

主要應用：
1、科研研究中，作為培養(yǎng)細胞上清和細胞裂解液去粘度的*酶制劑，去除核酸干擾提高后續(xù)蛋白純化或功能研究；
需求背景：進行重組蛋白純化或者天然蛋白提取研究中，*步就需要用細胞/組織裂解液如RIPA對其進行裂解釋放蛋白，此時往往伴隨著大量的基因組DNA被釋放出來，很多并不是獨立存在的，往往與核蛋白以復合物的形式存在，導致提取物非常粘稠，呈鼻涕狀。蛋白提取過程中若不能很好處理這些粘稠基因組，會造成蛋白提取效率的降低極核蛋白的丟失。傳統方法有采用超聲處理，DNase/RNase消化來降低或消除核酸影響，但由于操作的非標準化，通常難以評估此核酸清除步驟的有效性和數據穩(wěn)定性。
此時，若在加裂解液的同時加入一定量的Benzonase Nuclease全能核酸酶（廣譜核酸酶），可以很好的清除粗提物中的核酸，有效降低粘度【見圖1】，提高后續(xù)操作的效率。
                                                               
圖1、細胞裂解液經Benonase處理和未處理的比較圖。左管是僅加RIPA裂解液所得的離心產物，可看到鼻涕狀粘稠物懸浮在管中；右管事加RIPA裂解液和Benonase共同處理所得的離心產物，可看到上清非常透明。


2、用在生化分析樣品制備— — ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程，使用本品benonase處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，以及提高回收率。


3、疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白類核酸污染顯著降低至皮克級別，提供生物功效。


4、防止細胞凝聚（Cell clumping），特別是融化凍存的細胞樣品時；
應用優(yōu)勢：Benonase不僅無蛋白酶活性，而且不會對健康細胞的生長造成干擾。
應用背景：全血來源的外周血單個核細胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的應用價值，比如，定量疫苗誘導的T細胞反應。T細胞反應實驗zui初要求新鮮分離的細胞從而達到zui加的檢測信號，這給大規(guī)模的實驗中對樣本處理提出嚴格的操作限制。然而，凍存PBMCs（尤其是從凍存血液中分離出的PBMCs）一旦融化非常容易聚集到一起，影響后續(xù)的分析。
應用示例：Smith JG et al.研究顯示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化緩沖液中有效預防細胞凝聚，從而使得PBMC冷凍保存的應用成為可能?！疚墨I來源：Smith JG et al.Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】

Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.


產品優(yōu)勢：
1、酵母重組表達，無細菌內毒素殘留。【大部分商業(yè)化的Benonase都是大腸桿菌重組表達，由于自身菌株特性，不管純化方法如何，或多或少都會受細菌內毒素影響?！?/span>
2、無蛋白酶殘留，不會對蛋白本身造成干擾，影響測試結果準確性。
3、比活力高≥1.0×106U/mg蛋白【活性單位定義：在37℃，pH8.0反應條件，2.625ml反應體系中，30min內使△A260吸收值變化1.0（相當于*消化37μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）】
4、提供兩種純度的產品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者滿足zui基本的科研應用，價格更經濟實惠；后者滿足生物制品要求。
5、酶活性值：≥250 U/μL。對于小體積制備物，可用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀釋到一定濃度，再加入體系中。稀釋后溶液可4℃保存幾天維持穩(wěn)定。
6、液體酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。

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【注】：Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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Benzonase 全能核酸酶蛋白抽提

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