LysoSensor Yellow/Blue DND-160 黃/藍(lán)色溶酶體熒光探針      

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

為滿足研究者研究活細(xì)胞內(nèi)溶酶體生成和功能的動(dòng)力學(xué)特征，特此開發(fā)Lysosensor探針，一種區(qū)分酸性細(xì)胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針，由于質(zhì)子化聚集在酸性細(xì)胞器上。這一質(zhì)子化也使得因弱堿性側(cè)鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放，促使熒光信號(hào)增強(qiáng)。因此，LysoSensor探針遇酸后熒光信號(hào)呈現(xiàn)pH依賴性的增強(qiáng)。

LysoSensor Yellow/Blue DND-160（黃/藍(lán)色溶酶體探針）是一種獨(dú)*-特的比率型探針，呈現(xiàn)pH依賴性的雙激發(fā)和雙發(fā)射光譜峰（見Fig 1）。然而，活細(xì)胞中這一探針僅呈現(xiàn)pH依賴的雙發(fā)射光譜（發(fā)射波長比率~450/510 nm，激發(fā)波長~365 nm）。在酸性細(xì)胞器中，LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈現(xiàn)黃色熒光，而在酸性偏低的細(xì)胞器中具有藍(lán)色熒光。雙發(fā)射波長的測定允許比率成像分析在酸性細(xì)胞器比如：溶酶體或精子頂體內(nèi)的pH。其pKa值約為4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160，常常簡寫成PDMPO，普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉積和運(yùn)輸?shù)囊环N示蹤劑。

Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160的pH依賴性光譜反應(yīng)圖（A）熒光激發(fā)光譜（B）熒光發(fā)射光譜。

本品為DMSO儲(chǔ)存液，濃度為1mM。用于活細(xì)胞的溶酶體染色，建議工作濃度為≥1µM，需根據(jù)實(shí)際情況做優(yōu)化調(diào)整。

產(chǎn)品特征

1） 外觀：溶液

2） 濃度：1mM in DMSO

3） 亞細(xì)胞定位：溶酶體

4） 顏色：黃色、藍(lán)色

5） 檢測儀器：熒光顯微鏡

6） Abs（nm）：329，384nm [雙吸收波長，對pH敏感，見Fig 1]

7） Em（nm）：440，540nm [雙發(fā)射波長，對pH敏感，見Fig 1]

保存與運(yùn)輸方法

保存：≤-20oC避光干燥保存，收到貨至少12個(gè)月有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1） 整個(gè)染色過程中需注意避光。

2） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存，≤-20°C避光干燥保存，盡量避免反復(fù)凍融。工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制
利用生長培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM 儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度，工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。對于 Lysosensor系列溶酶體探針，推薦工作液濃度≥1µM；
【注意】：

1）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

2）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會(huì)觀察到熒光信號(hào)的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

2. 染色步驟（貼壁細(xì)胞）
1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。
2）待細(xì)胞生長到合適密度，吸除培養(yǎng)液，加入適量 37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基（必須完*-全覆蓋住細(xì)胞），在適合特定細(xì)胞類型的生長條件下孵育細(xì)胞30min-2h（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。
3）利用不含探針的新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液，并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間，使得染料能聚集在溶酶體上。

3. 染色步驟（懸浮細(xì)胞）
1）離心沉淀細(xì)胞，吸除上清。
2）利用適量 37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，在適合特定細(xì)胞類型的生長條件下孵育細(xì)胞30min-2h（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。
3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
4）用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間，使得染料能聚集在溶酶體上。
【注意】：

另一種方法，懸浮細(xì)胞可能會(huì)粘附到經(jīng) BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上，此時(shí)，可用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。

附錄I 溶酶體探針總表

溶酶體系列探針常見問題

1. 如何選擇合適的溶酶體探針？

答：對于溶酶體定位實(shí)驗(yàn)，請選擇Lysotracker系列探針，根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系，結(jié)合lysotracker系列探針的熒光特征，選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的熒光探針。Lysotracker Blue DND-22（MX4320-50UL）探針的光量子產(chǎn)率偏低，建議在非熒光選擇受限的情況下，推薦選擇其他幾款Lysotracker探針。對于酸性細(xì)胞器（比如溶酶體）的pH測定實(shí)驗(yàn)，請選擇Lysosensor系列探針。

2. 溶酶體探針染色后是否能做固定？

3. 溶酶體探針是否能用于流式分析和熒光光度計(jì)分析？

4. 溶酶體探針LysoTracker Green DND-26（MX4318-50UL） 和LysoSensor Yellow/Blue DND-160

（MX4316-50UL）的建議孵育時(shí)間多少？

LysoSensor 黃/藍(lán)色溶酶體熒光探針     

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